Procesul de purificare în aval al vaccinului împotriva diareei porcine
Diareea este una dintre cele trei boli majore care au cauzat mari pierderi economice industriei porcilor din China. Există mulți factori care cauzează diareea la porci, iar factorii virali sunt cei mai serioși. Porcii de toate vârstele pot fi infectați, în special purceii care alăptează, iar rata mortalității după infectare poate ajunge la peste 50%. Virusul diareei epidemice porcine (PEDV) și virusul gastroenteritei transmisibile porcine (TGEV) sunt larg răspândite în lume, iar cele două viruși pot fi infectate individual sau în combinație. În prezent, nu există medicamente specifice pentru tratarea PEDV și TGEV, iar prevenirea și controlul diareei porcine sunt în principal vaccinuri comerciale.
Vaccinurile tradiționale împotriva diareei epidemice porcine includ în principal vaccinul inactivat cu virus întreg și vaccinul viu atenuat. Din punct de vedere clinic, vaccinul inactivat în tandem PEDV și TGEV sau vaccinul atenuat și vaccinul triplu inactivat PEDV, TGEV și rotavirusul porcin (RV) sau vaccinul atenuat sunt utilizate în mod obișnuit, mai ales vaccinul în tandem PEDV și TGEV.
În prezent, în China există multe vaccinuri împotriva diareei epidemice porcine.
Procesul de producție al vaccinurilor inactivate și atenuate este similar, incluzând în principal cinci etape de cultură a agenților patogeni, inactivarea sau atenuarea agenților patogeni, extracția și purificarea agenților patogeni, prepararea și ambalarea vaccinurilor și controlul calității vaccinului. Acest articol prezintă în principal procedura de purificare a agenților patogeni.
Clarificare
Scopul clarificării este de a asigura îndepărtarea resturilor celulare și a altor agregate de particule mari. În producția de culturi celulare a unei varietăți de venin, pe lângă faptul că conține un număr mare de particule de virus, există multe resturi de țesut celular și produse metabolice și alte impurități, făcând veninul în stare tulbure sau semi-noros, direct utilizarea acestei operațiuni de concentrare a veninului va face în curând blocarea membranei de ultrafiltrare și nu poate finaliza concentrarea veninului, rezultând resturi de membrană de ultrafiltrare. Prin urmare, înainte ca veninul să fie concentrat, acesta trebuie mai întâi clarificat, ceea ce se face de obicei prin centrifugare la viteză mică și filtrare prin membrană. Trebuie remarcat faptul că atunci când se utilizează tehnologia de separare a membranei, deoarece materialul membranei este adesea cu electronegativitate sau grupări hidrofobe, este necesar să se investigheze dacă materialul membranei are adsorbție la particulele de virus.
O etapă eficientă de clarificare necesită o combinație de capacitate mare de îndepărtare a particulelor solide și randament ridicat de produs, amplificare ușoară și protecție a unităților de operare ulterioare din aval. În prezent, filtrul adânc este utilizat pentru operația de clarificare.
Cu toate acestea, atunci când scara de cultivare este prea mare, va fi necesar un număr mare de membrane de filtrare adânci, rezultând o creștere substanțială a costului consumabilelor. În același timp, densitatea mare a culturii celulare va reduce sarcina membranei de filtrare profundă, rezultând costuri crescute și diluare excesivă a produsului.
Metoda de microfiltrare folosește în principal dispozitiv de filtrare cu flux tangențial, iar componentele membranei sunt cassstte cu membrană plată și fibre goale. Filtrarea cu flux tangențial (TFF) este condusă de diferența de presiune transmembranară. Substanțele și impuritățile mai mici decât dimensiunea porilor membranei trec prin membrană, în timp ce impuritățile, cum ar fi celulele cu particule mai mari, sunt prinse. Dimensiunea porilor membranei utilizate pentru microfiltrare este de {{0}},45/0,22μm. Microfiltrarea cu flux tangențial cu fibre goale poate procesa direct lichid cu conținut ridicat de solide, cum ar fi mediul de cultură celulară de înaltă densitate, poate elimina pașii de centrifugare și prefiltrare cu mai puțini pași și operare simplă, membrana poate fi utilizată în mod repetat prin curățare, reducerea investițiilor în echipamente și operare. costuri, în conformitate cu cerințele producției automate modulare.
Concentrare și purificare
După clarificarea preliminară, mediul de cultură virală conține încă un număr mare de impurități, inclusiv particule defecte, înveliș viral, citotoxină, mediu, ser și fragmente de celule etc. Dacă aceste impurități sunt injectate în animale, ele nu vor afecta numai eficacitatea vaccin, dar, de asemenea, provoacă un răspuns imun puternic al gazdei și chiar duce la moartea animalelor vaccinate. Prin urmare, concentrarea și purificarea sunt necesare pentru a elimina impuritățile, cum ar fi heteroproteinele și fragmentele celulare, pentru a îmbunătăți și a induce răspunsuri imune eficiente, pentru a reduce cantitatea de vaccin utilizată și pentru a reduce reacțiile adverse.
Principiul purificării virusului: pentru a menține activitatea biologică și infecțiozitatea virusului ca premisă, pentru a elimina impuritățile virusului și a extrage puritatea ridicată a virusului.
În prezent, principalele metode de concentrare și purificare utilizate în producția pe scară largă sunt ultrafiltrarea.
Metoda de ultrafiltrare, utilizează în principal dispozitiv de ultrafiltrare cu flux tangențial, sistem de filtrare cu fibre goale și alte echipamente de filtrare, în circumstanțe normale, aplicarea metodei de ultrafiltrare poate face ca virusul să se concentreze de mai mult de 100 de ori, rata de eliminare a heteroproteinei de până la 99%. Printre acestea, tehnologia de filtrare cu membrană cu fibre goale are avantajele forței de forfecare ușoare și scăzute, obturare ușoară, funcționare flexibilă, durată lungă de viață și cost redus și amplificare ușoară, așa că se recomandă alegerea fibrei goale pentru concentrarea și purificarea virusului.
Când se utilizează metoda de ultrafiltrare pentru concentrare și purificare, este foarte important să se selecteze dimensiunea adecvată a porilor membranei, care determină în mod direct eficiența și calitatea concentrației. Pe de o parte, este necesar să se selecteze deschiderea membranei pentru a capta eficient moleculele țintă pentru a asigura randamentul, iar pe de altă parte, trebuie luate în considerare pe deplin efectul de îndepărtare și viteza de procesare a heteroproteinelor. Prin urmare, cel mai bun principiu este de a selecta membrana cu cea mai mare dimensiune a porilor care poate prinde molecula țintă și de a încerca să selectați membrana de filtru cu distribuție uniformă a dimensiunii porilor.
Virusul diareei epidemice porcine (PEDV) și virusul gastroenteritei transmisibile (TGEV) sunt ambele coronavirusuri, care sunt sfere polimorfe, cu vârfuri în formă de vârfuri inversate, cu diametrul cuprins între 60 și 190 nm. Boala rotavirus este o boală zoonotică în care rotavirusul (RV) are un aspect asemănător unei roți și are un diametru de aproximativ 70 nm. Acești trei viruși pot fi, în general, interceptați folosind membrane de ultrafiltrare cu deschidere de 100-750kd.
Guidling Technology este o întreprindere națională de înaltă tehnologie care se concentrează pe produse biofarmaceutice, culturi celulare, purificare și concentrare de biomedicină, diagnostic și fluide industriale. Am dezvoltat cu succes dispozitive de filtrare centrifugale, casete de ultrafiltrare și microfiltrare, filtru de virus, sistem TFF, filtru de adâncime, fibră goală, etc. Care îndeplinesc pe deplin scenariile de aplicare ale biofarmaceutice, culturi celulare și așa mai departe. Membranele noastre și filtrele cu membrană sunt utilizate pe scară largă în concentrarea, extracția și separarea prefiltrarii, microfiltrarii, ultrafiltrarii și nanofiltrarii. Numeroasele noastre linii de produse, de la filtrare de laborator mică, de unică folosință, până la sisteme de filtrare de producție, testare de sterilitate, fermentație, cultură celulară și multe altele, răspund nevoilor de testare și producție. Guidling Technology așteaptă cu nerăbdare să coopereze cu tine!
